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本制品是一种快速、便捷的用于3D培养的细胞球或类器官等的细胞核染色的溶液。仅需染色10分钟就可在荧光显微镜下观察到非常明亮的细胞核蓝色荧光染色。如果细胞球或类器官中有凋亡细胞，其细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。本制品不仅可以用于常规的细胞核染色，也能用于监测细胞凋亡等细胞核异常现象。

本制品适用范围广。本制品可用于各种方法培养出的3D细胞球或类器官，包括超低吸附细胞培养板、Matrix-Gel基质胶或Matrigel包被的平板、琼脂糖包被的平板、细胞悬滴培养板等。不仅可以用于常规的细胞核荧光染色，也能用于检测细胞凋亡。

本制品使用便捷，整个实验过程仅需约10～30分钟即可完成。对于常规的3D细胞活细胞染色，仅需加入本制品避光孵育10分钟即可进行荧光检测，也可以固定后再加入本制品进行染色。本制品固定后染色效果优于活细胞直接染色效果。

传统的细胞培养大多以二维(2D)的形式展开，但2D培养的细胞在生长方式、生长形态、分化和功能等方面都与体内生理条件下细胞的真实形态和结构存在明显差异，可能会因为细胞结构和组织形态的缺失，使实验结果的可信度降低。三维(3D)细胞培养能够更好地模拟体内细胞生存的微环境，更能代表体内组织，也能更真实的反应细胞与细胞间、细胞与基质间的相互作用，细胞对外源性和内源性刺激的应答也更接近于它们在体内的反应，3D细胞培养从而成为更有价值并更为可信的体外实验模型，能够获得与体内实验更加一致的实验结果。

• 本制品反复冻融可能会降低染色效果，为保证最佳使用效果，请尽量避免反复冻融，第一次解冻后可以适当分装保存。
  
• 细胞球在外力的作用下容易变形或分散，固定细胞球、PBS洗涤及换液等过程须轻缓，避免破坏或吹散3D细胞球。
  
• 本制品浓度经过百奥莱博的优化，确保可以满足活细胞染色及各种常规染色的需要。如需使用特定浓度的Hoechst 33342，请选购粉末装的Hoechst 33342。
  
• 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
  
• 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
  
• 尽管3D细胞球可以用本制品直接进行活细胞染色，但是为达到最佳染色效果，建议先用免疫染色固定液进行固定后再进行染色，效果更佳。

• 3D细胞的准备：在96孔3D培养板中每孔接种100μL细胞，细胞的接种量根据具体的实验方案，例如培养天数、需要的3D细胞球状体的大小等确定，按照3D细胞培养方案培养细胞。如有需要，可加入药物处理细胞。96孔3D培养板推荐使用3D细胞培养板包被液、3D细胞培养包被试剂盒包被的U形底96孔板，或直接使用超低吸附96孔板(YTC4962或YTC4961)、超低吸附黑色透明底96孔板等。
  
• 3D细胞固定(选做)：小心去除孔内培养液，每孔加入100μL免疫染色固定液，室温固定细胞10分钟。
  
  • 为达到最佳的使用效果，具体的固定时间可以根据细胞种类、培养天数、细胞球状体大小等进行调整。
  • 固定细胞球等过程须轻缓，避免破坏或吹散3D细胞球。
• 3D细胞Hoechst 33342染色：
  
  • 如果进行了细胞固定，小心去除免疫染色固定液；对于活细胞染色，小心去除原有细胞培养液。
    
  • 每孔加入100μL 3D细胞Hoechst 33342染色液，在适宜于细胞培养的温度避光孵育10分钟，对于固定的细胞可以室温避光孵育10分钟。
    
    • 为达到最佳的染色效果，具体染色时间可以根据细胞种类、培养天数、细胞球状大小等进行调整。
• 荧光拍摄：染色结束后，可以无须洗涤，即可在荧光显微镜下观察。如果对于染色效果的要求不是特别高，染色5分钟，即可在荧光显微镜下观察。染色结束后，加入适量的PBS小心洗涤细胞1～2次，染色效果更佳。
  
  • PBS洗涤及换液等过程须轻缓，避免破坏或吹散3D细胞球。